Обратный метод РИА
Для определения антигена в исследуемом материале используют также обратный метод РИА. В этом случае исследуемый антиген соединяют с известными мечеными антителами и инкубируют для формирования иммунного комплекса. Параллельно известный антиген, гомологичный меченым антителам, фиксируют на твердом носителе, куда добавляют затем смесь исследуемого антигена с мечеными антителами. В случае формирования иммунного комплекса между исследуемым вирусом и мечеными антителами метка остается в жидкой фазе. Твердофазовый метод РИА в последние годы удачно сочетается с так называемыми двойными антителами. В качестве «вторых» антител чаще всего используют антитела против человеческого глобулина.
Меченные 1251 антиглобулины используют для выявления иммунного комплекса вирус — человеческая сыворотка при диагностических исследованиях с целью обнаружения антител. Этот метод называется непрямым твердофазовым методом РИА. Наличие антител в исследуемой сыворотке, гомологичных данному вирусу, влечет за собой формирование иммунного комплекса, меченного радиоактивным изотопом и соединенного с твердой фазой. При отсутствии антител у данного человека метка оказывается связанной с жидкой фазой.
Этот вариант реакции может быть легко адаптирован для обнаружения не антител, а вируса в исследуемом материале. В этом случае в качестве известных антител должны использоваться человеческие антитела. Непрямой твердофазовый метод РИА позволяет легко определять в исследуемом материале как вирус, так и антитела, и обеспечивает возможность отделения иммунного комплекса путем простого отмывания твердой фазы от несвязавшихся компонентов.
Кроме того, непрямой метод обладает большей чувствительностью за счет усиления вируснейтрализующей активности антител при внесении антиглобулиновой сыворотки в иммунный комплекс [Гутман Н. Р., Кульберг. А. Я., 1973]. Преимуществом этого метода является возможность использования в качестве «второй» сыворотки одной и той же антивидовой сыворотки, меченной 125I, для проведения диагностических исследований с различными вирусами. Непременным условием при этом является применение античеловеческих антител или получение иммунных сывороток против различных вирусов на одном и том же виде животных.
Применение «вторых» меченых антител повышает также и специфичность реакции, поскольку исключает необходимость метки основных компонентов иммунного комплекса — противовирусных антител и вируса, активные центры которых в процессе внесения радиоизотопной метки могут частично денатурироваться, а значит, и изменять свою антигенную характеристику. В этой связи непрямой вариант РИА на твердой основе с применением «двойных» антител является наиболее удобной модификацией этого метода, Несмотря на многие преимущества, метод РИА, как и любой другой метод, имеет и существенные недостатки. Он требует специальной дозиметрической аппаратуры, защитного оборудования, постоянного наличия дорогостоящих радиоактивных изотопов, работа с которыми является в той или иной степени вредной. В этой связи весьма важной оказалась разработка иммуноферментного метода, организационно более простого и не менее чувствительного, чем РИА.
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
