Иммуноферментный метод (ИФМ)

Наиболее распространенным вариантом иммуноферментного метода является энзим связанный иммуносорбентный тест (ELISA), получивший в отечественной литературе название «РЭМА» (реакция энзим-меченных антител).

Принцип метода сводится к фиксации известного антигена на носителе с последующей обработкой его исследуемой сывороткой и выявлением комплекса антиген — антитело антивидовыми глобулинами, меченными ферментами. Результаты оцениваются по гистохимической реакции определения активности фермента.

Для выполнения теста необходимы:

• полистироловые пластинки или другие носители антигена, сенсибилизированные известным вирусом;
• высокоактивный антивидовой иммуноглобулин, меченный ферментом;
• субстрат, соответствующий ферменту, использованному для конъюгации иммуноглобулина.

В качестве носителей антигена могут быть использованы зараженные вирусом клетки, выращенные в лунках панелей, частицы геля (в частности, сефарозы 4В), зерна которого, активированные цианистым бромом, обладают хорошими сорбционными свойствами для фиксации на своей поверхности различных антигенов, и, наконец, обычные полистироловые панели для серологических реакций, на которых удовлетворительно сорбируются вирусы гриппа [Voller А. и др., 1977]. Сенсибилизацию лунок панелей проводят в течение 10 — 16 ч при 4°С или 30 мин при 37 °С. Концентрация антигена по белку должна быть в пределах 1 — 10 мг/л, так как более высокие концентрации вируса приводят к появлению неспецифических реакций. Сенсибилизированные антигеном панели 3-кратно промывают забуференным физиологическим раствором с добавлением твина-20 и высушивают.