Метод радиоиммунологического анализа (РИА)
РИА относится к группе так называемых методов связывания (bindings assays), основанных на формировании комплекса между антигеном и антителом, и обеспечивает возможность определения ничтожного количества различных веществ (вирусы, микроорганизмы, антитела, различные белки, лекарственные препараты, гормоны, ферменты). Принципиальная основа метода, отмеченного Нобелевской премией в 1977 г., была разработана R. Yalow и S. Berson (1960) для количественного определения инсулина в плазме человека.
Высокая чувствительность и специфичность РИА способствовали его широкому использованию в теоретической и практической вирусологии с диагностическими целями, для индикации вирусов в обследуемых материалах, для определения количества и качественных особенностей антител, с целью изучения антигенной структуры вирусов, их иммунохимического анализа и молекулярно-биологических механизмов синтеза вирусных антигенов. В последние годы метод РИА использовали для работы с вирусами гриппа, полиомиелита, герпеса, бешенства, осповакцины, альфа- и онковирусов человека и животных.
Применительно к задачам вирусологического исследования метод РИА основан на определении количества известного меченого антигена до и после его контакта с гомологичными антителами, которые предварительно взаимодействовали с неизвестным немеченым антигеном. Если последний соответствует по антигенной структуре меченому антигену и использованным в опыте антителам, часть или все активные центры антител будут блокированы этим неизвестным антигеном, и добавленный затем меченый антиген останется несвязанным или связанным лишь частично, что и будет зарегистрировано радиометрически.
Интенсивность конкуренции между известным меченым и неизвестным немеченым антигенами определяется степенью идентичности их антигенных свойств. При этом количество меченого антигена, способного вступить в иммунный комплекс с антителами, обратно пропорционально количеству немеченого антигена, уже адсорбированного антителами из исследуемого материала. Такая модификация метода называется прямым конкурентным РИА.
В настоящее время широко используется так называемый твердофазовый вариант РИА, при котором антитела или антигены (в зависимости от задачи исследования) адсорбируются на твердом носителе. В качестве носителя, или твердой фазы, используют различные полимеры (сефадекс, целлюлозу, производные полистирола, пробирки из разнообразных пластиков). Для обнаружения вируса в исследуемом материале (например, секрете из полости носа) антитела адсорбируют на выбранном носителе для получения так называемых иммобилизованных антител, способность которых формировать иммунный комплекс при этом не изменяется. Условия получения иммобилизованных антител разрабатывают индивидуально для каждого носителя. Такой вариант РИА обеспечивает возможность быстрого и легкого отделения иммунного комплекса, находящегося на твердом носителе, и меченого вируса, оставшегося несвязанным в жидкой части реагируемой смеси и подлежащего количественной радиометрической оценке.
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
