Клеточные культуры
Третий этап в истории культивирования вирусов гриппа в лабораторных условиях начался в 50-х годах и связан с применением клеточных и тканевых культур. Известно, что вирусы гриппа серотипа А инфицируют и вызывают заболевания не только у человека, но и у многих видов млекопитающих, домашних и диких птиц. Несмотря на столь широкое распространение и значительный круг хозяев в природе, вирусы гриппа А весьма умеренно, а чаще крайне слабо, репродуцируются в клеточных культурах различного происхождения. В связи с этим понятно, почему клеточные культуры не оказали столь же кардинального влияния на развитие исследований с вирусами гриппа А, В и С, как это случилось при изучении возбудителей кори, паротита, кишечных, рино-, адено-, корона-, рео- и некоторых других вирусных инфекций.
При культивировании вирусов гриппа применяются как первично-трипсинизированные, так и перевиваемые клеточные линии. Наиболее чувствительными биологическими системами, обеспечивающими репродукцию вирусов гриппа А и В до более высоких титров, оказались первичные культуры, содержащие эпителиальные клетки. К ним относятся культуры почек эмбриона человека, обезьян, хомяков, свиней. В то же время большинство перевиваемых тканевых культур не обеспечивало репродукцию вируса или оказывалось слабочувствительным к этому возбудителю. Наиболее продуктивными из перевиваемых культур были клетки конъюнктивы Чанга (клон 1-5С-4) и полученные из собачьей почки клетки MDCK (Madin Darby Canine Kidney).
Другие клеточные культуры при работе с вирусом гриппа используют значительно реже. Клетки MDCK в связи с их широким спектром чувствительности к различным вирусным агентам применяют для выделения многих респираторных вирусов. По уровню чувствительности к вирусу гриппа А и по эффективности вирусологической диагностики клетки MDCK не отставали, а иногда превышали показатели репродукции вирусов на куриных эмбрионах и культуре обезьяньей почки [Ch. Ga-ush, J. Smith, 1968].
Существенную роль в изучении вируса гриппа сыграла его способность формировать пляки в культуре клеток. Форма, величина и интенсивность формирования пляк являются индивидуальным признаком того или иного штамма вируса гриппа. Вместе с тем получение пляк с вирусами гриппа А встречает значительно большие трудности, чем с вирусами В.
При работе с пляками на доступной клеточной культуре куриных фибробластов чаще всего используют нейротропный штамм вируса гриппа A/WS/33 — A/WSN/33. Для усиления плякообразования применяют адаптацию вируса к соответствующей культуре или обработку клеток трипсином, вызывающим искусственное расщепление гемагглютинина на его тяжелую (HAl) и легкую (НА2) субъединицы, что повышает инфекционную активность вируса. Наличие гемагглютинина в расщепленной или нерасщепленной форме в значительной степени определяет уровень инфекционности вируса в клеточных культурах. Вместе с тем обработка трипсином существенно не отражается на конечных результатах репродукции вируса в куриных эмбрионах, поскольку аллантоисный вирус содержит уже «разрезанный» гемагглютинин. Степень увеличения инфекционности вируса при добавлении трипсина зависит в значительно большей мере от структуры гемагглютинина данного штамма, чем от его способности специфически активировать протеазы клетки [R. Rott, 1979].
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
