Доноры аттенуации для рекомбинантной вакцины
Мутанты с измененным кругом хозяев (host range мутанты). В ряде западных стран получение безвредных для людей рекомбинантов вируса гриппа базируется на использовании в качестве доноров аттенуации лабораторных штаммов, гиператтенуированных серийным пассированием на лабораторных животных или на куриных эмбрионах.
Основоположниками этого метода являются английские и бельгийские исследователи. К таким донорам относятся многократно пассированные штаммы вирусов гриппа A/PR/8/34/(H0Nl), А/Окуда/57/Н2N2/, B/Lee/40 и В/Сетаяга/3/56. Эти штаммы имеют длительную и не всегда точно известную историю пассажей в лабораторных условиях. Все они активно размножаются в развивающихся куриных эмбрионах. Основным генетическим маркером этих вирусов является критерий высокой репродуктивности, который и используют для отбора рекомбинантов при рекомбинации эпидемических вирусов A(H3N2) с указанными донорами аттенуации.
Скрещивая штамм (A/PR/8/34(H0Nl), пассированный через КЭ и другие клеточные культуры более 500 раз, с вирусом разновидности А/Гонконг/68(НЗN2), А. Веаге и соавт. (1975) добились передачи дикому вирусу признака высокой репродуктивности в КЭ с сохранением у него поверхностных антигенов эпидемического вируса. В связи с отсутствием других маркеров аттенуации проверка полученных рекомбинантов проводилась на ограниченных группах из 3 — 6 серонегативных волонтеров.
Вирулентность рекомбинантов колебалась в широких границах — от полного сохранения исходной вирулентности вируса A(H3N2) до удовлетворительной аттенуации.
Использование в качестве дополнительного маркера таких тестов, как интенсивность репродукции вируса и подавление активности движения ресничек органных культур из трахеи человека, не принесло ожидаемых результатов из-за отсутствия корреляций с вирулентностью рекомбинантов для человека. В последующие годы в Англии был накоплен большой опыт испытания на добровольцах рекомбинантов, полученных на основе вируса A/PR/8/34. Эти испытания выявили сохранение достаточно высокой остаточной вирулентности у подавляющего большинства высокорепродуктивных рекомбинантов, полученных при скрещивании вируса A/PR/8/34 с различными вариантами эпидемических вирусов A(H3N2) (А/Англия/42/72, А/Порт Чалмерз/1/73, А/Шотландия/840/74, А/Виктория/3/75).
Использование в качестве донора аттенуации методом генетической рекомбинации вируса, полученного в результате длительных последовательных пассажей на КЭ, страдает весьма существенным недостатком из-за отсутствия каких-либо дополнительных генетических, биологических или биохимических лабораторных маркеров аттенуации. В связи с этим безопасность полученных рекомбинантов всегда придется оценивать только по результатам испытания на больших группах волонтеров. Тем более трудно оценить без участия волонтеров иммуногенную активность рекомбинанта до передачи полученного штамма в массовое производство.
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
