Способы очистки и инактивирования вируса гриппа

В настоящее время редко используются такие устаревшие приемы освобождения вируса от балластных компонентов аллантоисной жидкости развивающихся куриных эмбрионов, как адсорбция на формалинизированные эритроциты курицы и элюция с них в уменьшенный объем солевого раствора или отмывание осадка вирионов в суперцентрифуге типа Шарплес. На смену имя пришла очистка вируса в зональных центрифугах в градиенте плотности, обеспечивающая максимальное удаление примесей аллантоисной жидкости.

В СНГ разработана более простая техника полноценной очистки вируса гриппа на хроматографи-ческих колонках из макропористого стекла [Бреслер С. Е. и др., 1975]. Высокоочищенный вирус инактивируют формалином, УФ-облучением или β-пропиолактоном, хорошо консервирующими антигенную активность обоих поверхностных антигенов (НА и NA). Корпускулярные (вирионные) инактивированные вакцины могут вызывать общие и местные токсические реакции за счет недостаточной очистки, а также повышенного содержания эндотоксина в вирусных частицах. Для снижения реактогенности инактивированных вакцин используют расщепленные (сплит) препараты с помощью обработки эфиром, дезоксихолатом натрия, трибутилфосфатом, что не обеспечивает полного подавления токсичности их внутреннего нуклеопротеина.

Поэтому расщепление вирионов с помощью различных детергентов было дополнено выделением главных поверхностных антигенов вирусной частицы — гемагглютинина и нейраминидазы — с усилением их прививочной активности до уровня вирионного препарата с. помощью таких адъювантов, как гидроксид алюминия. Получение нетоксических и высокоиммуногенных убитых вакцин особенно важно для иммунизации детей, требующих первоочередной защиты в силу их особо высокой заболеваемости и эпидемиологической значимости, как главного резервуара и источника рассеивания гриппозного вируса на окружающее население.

В настоящее время существуют 3 конкурирующих между собой варианта инактивированных вакцин:

• вирионная вакцина (из целых вирионов);
• расщепленная (сплит) вакцина;
• субъединичная вакцина из гемагглютинина и нейраминидазы.

Господствовавшая до 1968 г. вирионная вакцина из высокоочищенных и концентрированных вирионов нередко вызывала частые общие и местные клинические реакции на внутримышечное, подкожное или внутрикожное введение. Высокая реактогенность вирионной вакцины обычно связывалась не столько с несовершенной очисткой вируса и сохранением в ее составе балластных компонентов исходной вируссодержащей аллантоисной жидкости развивающихся куриных эмбрионов, сколько с присутствием внутренних белков и липополисахаридов самого вириона. Поскольку последние не участвуют в стимуляции иммунитета, они могут быть исключены из состава вакцины для снижения ее реактогенности. При этом удаляются нуклеопротеины, матричный белок, вирионные липополисахариды. Используемая для производства субъединичной вакцины более сложная и дорогостоящая техника может быть оправдана лишь убедительным обоснованием действительных преимуществ такого препарата, связанных, например, с элиминированием опасной для прививаемых людей реактогенности, если она не устраняется другими способами.

Вопрос этот не является достаточно ясным, поскольку некоторые новые способы более высокой очистки вирионной вакцины, например с помощью хроматографии на макропористом стекле, обеспечивают успешное решение основной задачи — устранения остаточной реактогенности для наиболее ранимых детских контингентов. Поэтому выбор того или иного метода производства инактивированной вакцины против гриппа должен определяться показателями их клинической реактогенности, высотой иммунного ответа, простотой и удобством введения препарата.

«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев