Кодирующие свойства сегментов геномной РНК вируса гриппа

Сохранившуюся трансляционную активность тестируют далее в системе бесклеточного синтеза белка, а выявляемые продукты трансляции анализируют по данным электрофореза в ПААГ или двумерной хроматографией триптических пептидов.

Другой подход состоял в использовании непосредственного сравнительного анализа электрофоретической подвижности полипептидов и сегментов РНК родительских и рекомбинантных штаммов вируса гриппа, которая определяется величинами молекулярной массы и заряда этих макромолекул. В этом случае результативность исследования была обеспечена удачным выбором родительской пары вирусов, у которых отчетливо различались по электрофоретической подвижности как одноименные полипептиды, так и соответствующие им сегменты РНК. Применение высокоразрешающего метода электрофореза в ПААГ с использованием для анализа единой пластины вертикального геля позволяет одновременно исследовать не только родительскую пару, но и большой набор рекомбинантных штаммов, в геноме которых имеются различные комбинации генов обоих родителей.

Кодирующие свойства сегментов геномной РНК вируса гриппа

В результате проведенных комплексных исследований было осуществлено полное картирование генома вируса гриппа [Palese Р., 1977; Scholtissek С, 1979а]. Наиболее высокомолекулярные 1 — 3 сегменты вРНК содержат информацию для синтеза трех белков транскриптазно-репликазного комплекса (P1, Р2 и РЗ). Сегменты 4 — 8, нумерация которых идет в порядке убывания их молекулярной массы, кодируют, соответственно, белки НА, NP, NA, Ml, M2 и двух неструктурных полипептидов (NS). Представленная схема носит еще весьма общий и предварительный характер, поскольку результаты эксперимента несколько противоречивы в отношении распределения кодирующих функций первых трех генов, кодирующих полипептиды P1, P2 и РЗ.

Установлено также, что 5-й по электрофоретической подвижности сегмент РНК не всегда кодирует молекулу NP, а 6-й — белок NA. У некоторых вирусов сегменты вРНК, кодирующие эти белки, меняются местами по подвижности при электрофорезе в ПААГ. До недавнего времени существовало мнение о моноцистронной организации генома вируса гриппа, согласно которому один ген (сегмент РНК) кодирует один вирусный белок, что соответствовало данным о наличии в составе генома вируса гриппа 8 сегментов РНК с информацией для синтеза лишь 8 вирусспецифических полипептидов в зараженных клетках. Новые экспериментальные сведения о кодировании геномом вируса гриппа 10 вирусспецифических белков послужили основанием для пересмотра этого представления [Lamb R., Choppin P., 1979; Allen H. et al., 1980; Lamb R., Lai C, 1981]. Результаты изучения генома вируса гриппа с помощью ДНК копии вРНК показали, что 8-й сегмент вРНК. содержит информацию для синтеза обоих неструктурных белков.

Установлено также, что и 7-й сегмент РНК генома кодирует синтез двух полипептидов матриксного белка Ml и М2 [Allen H. et al., 1980; Lamb R„ Choppin P., 1981; Lamb R., Lai C, 1981]. Таким образом, установлено, что геном вируса гриппа представлен односпиральной сегментированной РНК, содержащей 8 сегментов и кодирующей синтез 9 или 10 вирусспецифических полипептидов. По функциональной активности генома вирус гриппа отнесен к группе минус геномных вирусов, поскольку в его состав входит РНК неинформационной полярности, и трансляция вирусных белков обеспечивается вновь синтезируемой вирусспецифической информационной РНК, комплементарной геномной РНК вируса.

«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев