Детали процесса генетической рекомбинации
Детали процесса генетической рекомбинации и подбор оптимального донора аттенуации описаны выше, с обоснованием больших преимуществ генетически наиболее полноценных холодоадаптированных мутантов. Моделью их может служить вирус А/Ленинград/134/57, изученный и широко использованный для усовершенствования живых вакцин Г. И. Александровой в нашем отделе и позднее Н. Maassab в США.
Методика генетической рекомбинации между дикими эпидемическими вирусами гриппа и заранее подготовленными на долгие годы их эксплуатации холодоадаптированными вирусами — донорами аттенуации — создает преемственность работы по быстрому созданию новых вакцинных штаммов, как только получен сигнал о существенном изменении их антигенной структуры. Этот метод стал ведущим в последние годы благодаря регулярности, устойчивости и относительной быстроте искусственно вызванных генетических изменений, сохраняющих антигенную специфичность дикого вируса и точно предсказуемую безвредность для прививаемых людей, перенесенную донором аттенуации. Холодоадаптированные доноры аттенуации переносят в геном рекомбинантного вакцинного штамма отчетливо маркированную генетическую информацию с участием не менее 3 внутренних генов, несущих комплексную ответственность за обеспечение надежной авирулентности, документируемой размножением при 25 — 28 °С, при оптимальном пороге репродукции при 32 — 34 °С и непермиссивном пороге в 38 — 40 °С, т. е. сочетанием свойств холодовой адаптации с ts-признаком. Наличие у вируса этих наследуемых маркеров аттенуации весьма облегчает первичный отбор формирующихся при рекомбинации перспективных кандидатов в вакцинные штаммы, освобождая от чрезмерного числа ненужных трудоемких испытаний на волонтерах.
Огромную помощь в молекулярно-генетическом анализе происходящих при рекомбинации пересортировок фрагментов вирусной РНК оказывают современные молекулярно-биологические методы идентификации условно-летальных повреждений в геноме вакцинного штамма, внесенные в его состав вместе с генами авирулентности от аттенуированного донора. Число таких мутантных генов, гарантирующих авирулентность живой гриппозной вакцины, должно быть, по нашим данным, не менее 3, причем их идентификация и механизм взаимодействия разработаны еще недостаточно. Возможность быстрого выполнения in vitro детального анализа генетического состава вакцинных штаммов значительно сократила бы большую потребность в волонтерах.
Вакцинные штаммы должны обладать высокой генетической стабильностью. Прочность приобретенных ими биологических свойств должна сохраняться без изменений в период всех этапов подготовки и применения вакцинного штамма для производства. Особого внимания заслуживает опасность реверсии вирулентных свойств, о чем сигнализирует ослабление или исчезновение ts-признака, с восстановлением репродукционной активности вакцинного штамма при непермиссивной температуре (38 — 40°С).
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
