Универсальный донор эгтенуации
Специалисты США возлагали большие надежды на использование вируса ts-1/E/ в качестве универсального донора эгтенуации для получения рекомбинантов с различными вирулентными вирусами гриппа разновидности А/Гонконг/68(H3N2).
Однако в связи с неудачами использования этого донора для получения безвредных рекомбинантов возникла необходимость подготовки для этих целей другого термочувствительного мутанта — А/Удорн/72 — ts-lA2, имеющего 2 мутации в генах, кодирующих белки РЗ и PI [Murphy B. et al., 1979, 1980]. Оказалось, что оба вируса — ts-1/E/ и ts-lA2, полученных на основе термочувствительных мутантов, обработанных химическим мутагеном и имевших по две точечных ts-мутации генов (соответственно в РЗ, NP и РЗ, Р1), были малопригодными как доноры аттенуации в связи с частой реверсией в ts+ фенотип и полной аттенуацией для особо восприимчивых детей и взрослых.
В связи с указанными недостатками ts-мутантов пришлось искать другие пути к разработке более совершенных доноров аттенуации, которыми оказались холодоадаптированные мутанты вируса гриппа А, полученные в Ленинграде в отделе вирусологии Института экспериментальной медицины АМН СНГ [Александрова Г. И., Смородинцев А. А., 1965; Александрова Г. И., 1977], а также в США в лаборатории Н. Maassab (1967, 1975). Возможность глубокой аттенуации вируса гриппа в процессе длительных пассажей при температуре 25 — 26 °С была обоснована в работах Г. И. Александровой и А. А. Смородинцева по получению специального варианта живой гриппозной вакцины для детей (1961 — 1965). Мы адаптировали к низкой температуре вакцинные штаммы вируса гриппа А и В, безвредные для взрослых, но реактогенные для детей, прошедшие предварительно 17 — 24 пассажа на куриных эмбрионах при оптимальной температуре.
После 17 — 30 дополнительных пассажей при 25°С регулярно удавалось получать предельно аттенуированные варианты, не вызывавшие у детей клинических реакций. Таким образом, в отличие от вируса A/PR/8/34(H0Nl), наши адаптированные к низкой температуре вирусы имели точно известную историю пассажей (не более 33 пассажей). Холодоадаптированные штаммы вирусов гриппа А и В приобрели в процессе длительных пассажей при низкой температуре важный генетический признак — термочувствительность, т. е. неспособность или низкую активность репродукции в куриных эмбрионах при повышенной температуре (40 °С — для вирусов типа А и 39 °С — для штаммов типа В) [Александрова Г. И., Смородинцев А. А., 1965; Медведева Т. Е. и др., 1968, 1971].
Для определения термочувствительности проводилось одновременное титрование вирусов на куриных эмбрионах при оптимальной и непермиссивной температуре и вычислялась разность показателей содержания накопившегося вируса, выраженную в lg ЭИД50, максимальные показатели — 6*5 — 7*25 lg — свидетельствовали о высокой термочувствительности вируса [Медведева Т. Е. и др., 1969].
Холодоадаптированные вирусы имеют еще один важный отличительный признак — более высокую способность к образованию пляк при сниженной до 25°С температуре, в то время как уличные терморезистентные штаммы в этих условиях размножаются менее активно.
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
