Температурочувствительные рекомбинанты
Температурочувствительные штаммы со сниженной репродукционной активностью в супероптимальном температурном режиме (выше 36°С для вируса гриппа типа А и выше 34°С для штаммов типа В) можно получать под воздействием химических веществ, обладающих мутагенным действием. Наиболее часто в качестве мутагенов используют азотистую кислоту, 5-фторурацил, формальдегид и т. д.
Температурочувствительные мутанты были получены со многими вирусами человека, животных, бактерий и использовались главным образом в генетических исследованиях по картированию генома вирусов, при изучении функций отдельных генов для расшифровки механизмов распределения и наследования генетических признаков. Делались также попытки использовать ts-мутанты для практических целей иммунопрофилактики, поскольку выделение ts-мутантов во всех семействах вирусов, болезнетворных для людей и стимулирующих развитие иммунитета, означало, как правило, снижение их вирулентности для основных хозяев, а также для лабораторных животных.
Температурочувствительные мутанты вируса гриппа были впервые получены в США J. Mills и др. (1969, 1971). Уличный штамм, изолированный на севере США от новобранца, A/Great Lakes/389/65 (H2N2) разновидности А/Сингапур/57 выращивали в присутствии 5-фторурацила, снижавшего инфекционность вируса в 100 раз. Было изолировано около 350 пляк, которые обследовали на способность содержавшегося в них вируса репродуцироваться при повышенной до 38°С температуре. Два клона (ts-1 и ts-2) отличались от исходного вируса температурочувствительностью, сниженной репродукцией при 38 — 37 °С соответственно. Авторам не удалось изучить болезнетворные свойства температурочувствительных клонов ts-1 и ts-2, поскольку клинические испытания были проведены в конце эпидемического цикла, вызванного вирусом А/Сингапур/57, т. е. в период, когда среди волонтеров трудно было найти серонегативных лиц к вирусу A(H2N2). В связи с этим, как мутанты, так и исходный штамм оказались совершенно безвредными для добровольцев и не вызывали реакций при введении в верхние дыхательные пути обследованных людей.
Более убедительные данные о снижении вирулентности ts-мутантов были получены в США R. Chanock с сотр. при испытании двух рекомбинантов вируса ts-1 и эпидемического штамма А/Гонконг/68(Н3N2), обозначенных ts-1/E/ и ts-1/A/. Рекомбинанты унаследовали поверхностные антигены от вирулентного эпидемического вируса, но характеризовались столь же выраженной неспособностью к размножению при повышенной температуре, как и мутант ts-1 [Chanock R, Murphy В., 1980].
Наличие корреляции между термочувствительностью и аттенуацией обусловлено, по мнению J. Mills, R. Chanock (1971), неспособностью ts-вариантов к размножению в нижних дыхательных путях, где поддерживается естественная температура 37°С, при сохранении высокой репродукционной активности з носоглотке, имеющей, по мнению авторов, более низкую температуру (32 — 34°С). Это предложение, впервые проверенное при испытании мутантов ts-1 и полученных на их основе рекомбинантов, нашло полное подтверждение в дальнейших работах с термочувствительными вариантами вируса гриппа и легло в основу широкого использования указанного маркера для предварительной лабораторной оценки степени вирулентности вирусов для людей. Генетический анализ установил наличие у вируса ts-1/E/ двух термочувствительных мутаций в 1 и 5 генах, кодирующих белки РЗ и NP [Palese P., 1977], которые регулярно передаются рекомбинантам при скрещивании вируса ts-1/E/ с вирулентными уличными штаммами.
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
