Способы аттенуации вирусов гриппа А и В при помощи длительных пассажей вируса на куриных эмбрионах
Этот способ предусматривает применение классического принципа аттенуации, введенного в практику подготовки живых вакцин Л. Пастером и основанного на адаптации возбудителей к организму гетерологичного хозяина. Развивающийся куриный эмбрион (КЭ) имеет в этом отношении ряд существенных преимуществ в связи с его универсальной восприимчивостью к различным биологическим и антигенным вариантам вирусов гриппа А и В. Являясь незаменимой моделью для выделения возбудителей гриппа от больных людей, развивающийся КЭ пригоден и для аттенуации подавляющего большинства диких уличных вирусов гриппа, главным образом для серийного производства живых ослабленных вакцин.
По многолетнему опыту нашей лаборатории [Чалкина О. М., 1955; Жилова Г. П., 1973а] для подготовки ареактогенных вакцинных штаммов вируса гриппа А требуется от 10 до 25 пассажей, проводимых при оптимальной температуре 34 °С, с интервалом в 48 ч, позволяющим выполнить 3 пассажа в неделю. Проделав среднее число пассажей (например, 18), проверяют последний из них на 5 — 8 восприимчивых взрослых волонтерах и через 72 ч выясняют ориентировочный уровень реактогенности пассируемого вируса. Если у волонтеров отсутствуют клинические реакции, дальнейшие пассажи прекращают и переходят к проверке хранившихся в замороженном состоянии вариантов вируса с меньшим уровнем аттенуации (15, 12, 9 пассажей).
Отбирают таким образом штамм с допустимым уровнем реактогенности, при котором не более 1 — 2 волонтеров из 100 отвечают на интраназальное введение вируссодержащей аллантоис-ной жидкости повышением температуры выше 37,5 °С. Если после 18 пассажей вирус сохранил реактогенность, продолжают пассировать до 25 раз, после чего повторяют снова указанную процедуру, двигаясь из соображений безопасности от большего уровня аттенуации к меньшему. В связи с достаточно высокой эффективностью указанной системы аттенуации не обосновано утверждение западных специалистов [Murphy В. N. et al,. 1976] о непредсказуемости ее результатов, хотя и требующих действительно большей затраты времени на ослабление вирулентности вируса, чем метод генетической рекомбинации.
Для обеспечения наиболее однородной популяции вирионов на завершающем этапе получения вакцинных штаммов, пассированных через КЭ, проводится систематическое клонирование вируса путем заражения яиц предельными разведениями пассируемых вирусов.
«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев
