Экспресс-диагностика гриппа (метод коагглютинации)

Высокоперспективным по нашим и литературным данным, оказался новый метод экспресс-диагностики гриппа, основанный на использовании Staphylococcus aureus группы А (штамм Cowan 1), сенсибилизированный антителами [Zalan E., Wilson С, 1976, 1978]. Принцип метода основан на способности гамма-глобулинов и связанных с ними антител интенсивно адсорбироваться на поверхности золотистого стафилококка. Антитела своим Fab фрагментом прочно соединяются с белком А оболочки этого микроба. При взаимодействии адсорбированных антител с гомологичным антигеном происходит быстрая агрегация и агглютинация микрококков, различаемая простым глазом. В качестве эталонного микроба применяют штамм Cowan, высокоавидный к антителам класса IgG человека, кролика и других животных. Для стандартизации взвеси стафилококка его предварительно стабилизируют 0,5 % раствором формалина или формальдегида, отмывают от избытка формалина в центрифуге, прогревают при 80 °С в течение 2 мин и соединяют с высокоактивной антисывороткой, специфичной против того или другого вируса (грипп А, грипп В, аденовирусы, парагрипп, респираторно-синцитиальный вирус и др.).

Наилучшие доноры иммуносывороток — кролики, бараны, антитела от крыс и мышей адсорбируются плохо.

Для получения препарата, используемого при диагностике гриппа, необходимо:

• культивирование стафилококка в условиях, обеспечивающих накопление протеина А в оболочке;

• стабилизация и фиксация протеина А на клеточной поверхности обработкой микробной культуры 0,5 % формалином и последующим 2-минутным прогреванием при 80 °С [Кгоnvall G., 1973];

• подготовка высокоактивной иммунной противогриппозной сыворотки для сенсибилизации стафилококка;

• адсорбция IgG антител иммуносывороток кролика 10 % взвесью стабилизированных стафилококков в течение 30 мин при комнатной температуре;

• трехкратное отмывание сенсибилизированной антителами взвеси золотистого стафилококка солевым раствором и приготовление из осадка 1 % микробной взвеси;

• использование полученной взвеси для экспресс-диагностики по следующей методике: 1 каплю исследуемого материала соединяют с 1 каплей сенсибилизированных микробов.

При соответствии антигена антителам, адсорбированным на микробной взвеси, через — 20 мин наступает агглютинация, учитываемая визуально. Указанную методику впервые применили для идентификации лабораторных штаммов вирусов А и В Е. Zalan и С. Wilson (1976). Используя неразведенную аллантоисную или тканевую суспензию вирусов и сенсибилизированные бактерии (по 1 капле каждого ингредиента), авторы наблюдали специфическую агглютинацию на стекле в случае соответствия антигена и антител сенсибилизированных стафилококков и отсутствие агглютинации при их несоответствии.

Время, необходимое для развития видимой реакции, составляет 5 мин при титре вируссодержащей суспензии по РГА не ниже 1 : 64, в противном случае реакция не наступала. Следовательно, использованные в опытах Е. Zalan и С. Wilson (1978) неразведенные взвеси аллантоисного и тканевого вируса, содержавшие 7 — 8 lg в 0,2 мл, значительно превосходили реальное содержание гриппозного антигена, определяемое в секретах верхних дыхательных путей гриппозных больных, составляющее 4 — 5 lg в 0,2 мл. Модифицировав эту методику путем сенсибилизации стафилококка высокоавидными иммунными сыворотками к вирусам гриппа А различных подтипов и В, а также к другим вирусам негриппозной этиологии, мы показали возможность диагностировать гриппозную, адено-, респираторно-синцитиальную, парагриппозную и микоплазменную инфекцию путем непосредственного исследования секретов от больных людей.

Материалом для обследования служил секрет из полости носа, предварительно освобожденный от неспецифических гетерогемагглютининов. Для контроля полученных результатов проводилось одновременное выделение вируса на куриных эмбрионах из тех же материалов, а также исследование парных сывороток крови в РСК и РТГА. Приняв результаты серологического метода в качестве главного критерия, мы смогли оценить метод коагглютинации как достаточно чувствительный и специфичный. Из 23 больных с диагностированной гриппозной инфекцией методом экспресс-агглютинации в 19 случаях (82,7 К) диагноз был подтвержден вирусологическими и серологическими данными обследования.

«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев