Главная / Профилактика гриппа / Диагностика гриппа / Реакция непрямой гемагглютинации (РИГА)

Реакция непрямой гемагглютинации (РИГА)


26 февраля 2009

Одной из разновидностей метода непрямого иммунологического анализа, используемого для диагностики гриппа, является РИГА. Принцип РИГА основан на способности эритроцитов, адсорбировавших вирусы, агглютинироваться в присутствии антител иммунной сыворотки [Исаченко В. А., Соковых Л. А., 1964; Авророва Р. И., 1966]. Установлено, что использование танина для приготовления эритроцитарного диагностикума из вируссодержащей аллантоисной жидкости снижает специфичность РИГА, а сенсибилизированные таким образом эритроциты неустойчивы при длительном хранении. Э. П. Корнеева, Я. С. Шварцман (1972) разработали микрометодику РИГА, успешно используемую для диагностики гриппа.

Действующим началом диагностикума служит вирус гриппа, очищенный сорбцией — элюцией и ультрацентрифугированием. Для прочной фиксации вируса на эритроцитах барана, обработанных формалином, авторы использовали бидиазотированный бензидин (БДБ).

Лиофилизация комплекса вирус — эритроцит обеспечивала получение препарата с неограниченным сроком годности, что сделало возможным централизованное изготовление диагностикума для РИГА. В Центральной серологической лаборатории ВНИИ гриппа МЗ СНГ А. Н. Найхин (под руководством А. А. Смородинцева и Л. Ю. Тарос) сравнил чувствительность и специфичность РИГА с РТГА, РСК и РН для диагностики гриппозной инфекции с сыворотками:

  • больных с естественной гриппозной инфекцией;
  • добровольцев, иммунизированных умеренно аттенуированным вирусом гриппа А/Гонконг/1/68(Н3N2);
  • людей, привитых живой гриппозной вакциной.

При этом наиболее высокие диагностические показатели сероконверсий отмечались в РИГА и РН у больных гриппом и иммунизированных добровольцев. Наименьшее число сероконверсий выявляла РТГА. Диагностические показатели РНГА приближались к результатам РСК при естественной гриппозной инфекции. Отмечалось значительное отставание РСК при иммунизации умеренно аттенуированным вирусом гриппа и после прививок живой вакциной. Наибольшее число совпадений положительных результатов диагностики гриппозной инфекции у реконвалесцентов и у привитых умеренно аттенуированным вирусом волонтеров было отмечено по данным РНГА и РН. По сравнению с РТГА у 27,3 % волонтеров РНГА дополнительно диагностировала достоверное нарастание уровня антител, а по сравнению с РСК — у 36,4 %.

Диагностическое обследование больных детей в эпидемию 1972 — 1973 гг., вызванную вирусом гриппа А разновидности А/Виктория/35/72, показало наибольшее превосходство РНГА и РСК перед РТГА по сравнению с результатами обследования сывороток взрослых. Наблюдалось отсутствие различий в диагностических показателях РНГА В эпидемический и межэпидемический периоды, что было характерно также для РСК, в противоположность указанному выше резкому отставанию по данным РТГА. Исследование парных сывороток волонтеров, получивших вирус гриппа А, в РНГА, РН, РТГА и РСК с гомологичным вирусом и с гетерологичным вирусом гриппа В показало весьма высокую специфичность РНГА, не уступающую аналогичным показателям РН и РТГА. Это подтверждается также наличием корреляций между исходным уровнем антител в сыворотках волонтеров по данным РНГА и степенью клинических реакций на введение им умеренно аттенуированного вируса А/Гонконг/68. В связи с высокой чувствительностью, простотой постановки, отсутствием влияния неспецифических ингибиторов, а также стабильностью лиофилизированных эритроцитарных препаратов при длительном хранении РНГА используют для серологической диагностики гриппа.

По данным Н. А. Ивановой (личное сообщение), РНГА характеризуется не штаммовой, а типовой специфичностью, выявляя антитела к подтипам вируса гриппа A(H0N1, H1N1, H2N2, H3N2), т. е. к внутренним антигенам, общим для всех штаммов вируса гриппа А. Это может объясняться, по мнению А. А. Смородинцева, активным липидорастворяющим действием бензидина, используемого для фиксирования на мембране эритроцитов вирионов, превращающихся под влиянием БДБ в «растворимый» антиген. Невозможность дифференцировать антитела к вирусу гриппа А разных подтипов ограничивает применение РНГА для решения задач иммунологии гриппозной инфекции, требующих методов, которые позволяют более точно охарактеризовать специфичность сывороточных или секреторных антител при изучении иммунных сдвигов у реконвалесцентов и особенно у людей, получивших гриппозные вакцины.

Не менее важно для диагностики гриппа и определение уровня антител ко второму по важности антигенному компоненту вируса гриппа — нейраминидазе (NA), что позволяет более полно оценить состояние противогриппозного иммунитета. Наряду с рекомендованным ВОЗ более сложным способом определения антинейраминидазных антител, пригодны и более простые методики определения сывороточных антител к нейраминидазе [Holston Г., Dowdle W., 1973]. Один из таких приемов, основанный на РНГА, выполняется с ипользованием бараньих эритроцитов, обработанных танином и сенсибилизированных нейраминидазой, изолированной электрофоретически из высокоочищенного рекомбинантного вируса гриппа. При исследовании сывороток от реконвалесцентов и людей, привитых против гриппа, этот диагностикум выявил высокий процент положительных результатов по сравнению с реакцией ингибиции нейраминидазы (РИНА). Указанный способ прост в выполнении и более чувствителен, чем другие реакции титрования антинейраминидазных антител. Более простой способ титрования антинейраминидазных антител основан на принципе ингибиции элюции (РИЭ) [Арpleyard L., Oran G., 1977]. Для проведения реакции необходимы антигенные рекомбинанты с гетерологичным неактуальным гемагглютинином и гомологичной нейраминидазой. Сравнительное изучение в РИНА и РИЭ 160 сывороток здоровых людей в возрасте 16 — 18 лет показало более высокую чувствительность РИЭ, чем РИНА [Топурия Н. В. и др., 1980; Найхин А. Н. и др., 1980].

«Грипп и его профилактика», А.А. Смородинцев

Комментарии закрыты.

Top

Vitaminov.net